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做qPCR实验时，扩增曲线“躺平”、荧光信号低到怀疑人生？ 别慌！这可能是实验中最常见的“翻车”场景之一。今天带你从模板、试剂、仪器三大维度深度排查！ 一、模板篇：你的DNA/RNA可能“病了” 症状诊断 模板量不足：DNA浓度过低（

免疫沉淀（IP） 是一种利用抗体将目标蛋白从一个混合物（如细胞裂解液）中将该蛋白富集出来的技术，如果该蛋白同时结合了其他的蛋白，就可以将整个复合体富集纯化。IP 通常可以用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰（如磷酸化、泛素化）或蛋白质纯化。 IP 和 Co-IP 都是利用抗体富集目标蛋白的技术，而IP是从复杂样本中特异性富集某个单一的目标蛋白， Co-IP则是为了证明两个或多个蛋白有相互结合，比如用蛋白A的抗体富集，得到的产物检测是否有蛋白B，有的话就可以证明蛋白AB有相互结合。 其实看懂ip结果图只要几个关键点！ 哪个是免疫沉淀前的初始样本，哪个是免疫沉淀后的产物？ 用什么抗体把什么蛋白拉下来？ 需要检测的与被拉下来的蛋白相互作用的蛋白是什么？ 第一步: 看图注首先我们阅读图注，从AATF-XRCC4 interaction可以看出来，这里需要研究的AATF-XRCC4 这两个蛋白的相互作用。使用的是工具细胞293T，而且是表达带有Flag tag的AATF突变型的293T。 第二步: 看inputinput指的是进行免疫沉淀实验投入的总样本...

qPCR实验之前通常需要提取RNA，测量浓度，配置逆转录体系反应，再进行qPCR体系配置和反应。中间操作步骤繁多，不仅耗费时间和精力，还增加了实验误差和样本污染的风险。 如果细胞数量很少，甚至无法通过常见的RNA提取方法获得足够的RNA进行下游实验。 为了解决这些问题，信天翁生物推出新产品 ——RNAflash DCA（Direct Cellular Amplification）one step RT qPCR（SYBR Green）kit。 最少只需要10个细胞，可以直接由细胞起始获得qPCR Ct值。 实验流程 产品特点1灵敏度高：最低仅需10个细胞即可完成检测，可以兼容多种细胞；可用于极少量珍稀细胞样本的实验。 2操作简单简化中间流程，在培养孔内5分钟完成细胞裂解，7分钟内完成gDNA消化，避免纯化造成的RNA损失；省去RNA提取和逆转录步骤，减少人为误差。 3兼容高通量检测满足大规模细胞样本的平行处理需求，显著降低了高通量检测过程中的时间成本以及操作误差； 4实验时间短优化的一步法RTqPCR体系兼容裂解体系，裂解细胞后可以一次性完成逆转录及qPCR扩增，...

为什么我们发表文章时，组间差异比较，P

基因序列我们都知道可以在NCBI数据库查询，那么蛋白序列又应该在哪里找呢？ 当然了NCBI也是可以查询到蛋白质序列的，但是我们今天给大家介绍另一个数据库Uniprot 在搜索框输入需要的目的蛋白的名字检索，以PDL1为例。结果会显示相近的所有结果，这个数据库主要以小鼠和人的蛋白为主。 我们可以选择人的PDL1，点击entry下面的号码。 近入详情页，Q9NZQ7也就是我们刚刚点击的号码，这是在这个数据库里PDL1这个蛋白对应的编码，类似他的身份证号码。对于名字相近的蛋白，我们都可以以这个号码为准，用来判断两个蛋白是否为同一个蛋白。这里还可以看到这个蛋白对应的gene symbol是CD274，他的长度是290个氨基酸。 在function栏可以查看蛋白的功能 基因和蛋白的各种别名 这里还有一个比较有用的功能，可以查看蛋白的亚细胞定位，比如PDL1，我们可以看到它是一个膜蛋白，是单次跨膜的蛋白，在细胞核也有表达。 继续往下面看，expression表达一栏，可以看到这个蛋白一些已经报道的表达部位。 接下来就到了我们标题的重点，蛋白序列的查看。选择seq...