A260/A280、A260/A230比值偏低，主要的原因就是酚残留，别急着把样本丢弃，大可不必从头再来，下面教大家如何重新洗涤沉淀，得出理想的RNA纯度。 方法一： 如果是用Trizol提取RNA，最后得出来的OD值比较低，可以重新吸附、洗涤，注意是直接洗涤两次，之后离心时可以两次将 EP 管置于不同的方向，便于溶液中的各个部分都能得到充分的洗涤。 方法二： 加入0.1倍体积的3M sodium acetate以及3倍体积的冰乙醇，将混合物置于-80℃下冷藏过夜，第二天离心，之后再使用75%的冰乙醇洗涤沉淀物。 具体操作步骤： ①在不纯的RNA样本中加入0.1倍体积的3M 醋酸钠、2.5~3倍体积冰上预冷的无水乙醇（100%），旋涡充分混合。 ②在-20℃下沉淀1小时或过夜，又或者在-80℃下沉淀一小时（如果RNA量很少，过夜放置可以产生更多沉淀）。 ③4℃下最高速离心（13000rpm）30分钟 ④用0.5 mL冰上预冷的75%乙醇洗涤RNA沉淀两次，每次在4℃下离心10分钟 ⑤去除乙醇，吸走大部分乙醇后，可以快速离心（最高速度离心10秒），尽可能去除剩余的乙醇。 ⑥风干沉淀并重悬于...

以信天翁的qPCR试剂盒为例，对于20 μL的反应体系，模板DNA的加入量应控制在1~2 μL（10~200 ng/20 μL）之间。  01如果模板投入过少，可能会有以下影响检测灵敏度降低： 模板DNA量不足可能导致荧光信号的累积低于检测阈值，使得qPCR仪器无法准确检测到扩增信号。 Ct值偏大： 模板量少意味着需要更多的循环次数才能达到阈值，导致CT值变大。 定量准确性受影响： 模板DNA量不足可能导致计算出的目的基因表达量不准确，影响实验结果的可靠性。 实验重复性差： 当模板DNA量不足时，实验对各种条件（如反应体系的组成、操作过程中的微小变化等）变得更加敏感，随机误差放大。这意味着即使是微小的实验条件变化，也可能对实验结果产生较大影响。 02如果模板投入过多，可能会有以下影响：Ct值偏小： 由于模板量充足，扩增达到检测阈值的循环数减少。 非特异性扩增增加： 高模板浓度可能增加非特异性结合，导致非目标序列的扩增。 抑制聚合酶活性： 过多模板可能消耗反应体系中的必需离子，如镁离子，抑制酶活性。 荧光信号干扰： 可能影响荧光染料...

PCR产物纯化柱又双叒不够用了怎么办，能不用质粒纯化柱来替代使用呢？ 大部分实验室的buffer和纯化柱的数量不成正比，试剂盒中buffer过多，造成纯化柱相对短缺。其实，PCR产物纯化柱和质粒纯化柱是可以混用的。尽管它们主要用途不同，但它们的结构和原理类似，且均基于硅胶膜的吸附特性    分析  让我们先来看看纯化柱的结构和原理： 纯化柱有一层硅胶膜，材质是玻璃纤维的，能够能够选择性地吸附DNA和RNA，作用类似于一块过滤器。 在高盐浓度和低pH条件下，硅胶膜能够选择性地吸附DNA和RNA。而在低盐浓度和高pH条件下，DNA和RNA则会被释放出来。 硅胶膜的表面携带有大量修饰的硅羟基，在溶液中会解离，产生负电荷。当DNA或RNA与盐离子结合后，它们会与硅胶膜表面的硅羟基形成电桥，从而被吸附在硅胶膜上，而其他物质则被洗脱掉。 在PCR纯化过程中，加入binding buffer可以降低溶液的pH值，从而让DNA容易被吸附在硅胶膜上。 所以应该要使样本在加入柱子时，所处的溶液的pH值小于7。随后，使用的washing buffer中乙醇浓度不...

想要研究一个基因，应该如何下手呢？ 以较常见的肿瘤基因研究为例，给大家简单介绍一下主要步骤。 一确定研究基因！ 文献回顾与数据库搜索：通过查阅相关文献和数据库（如PubMed、TCGA、GEO等），确定在肿瘤中具有研究价值的基因A。 基因选择：优先选择未被广泛研究的基因，或者从已知研究中找到新的切入点。 基因功能预测：基于基因注释和现有研究，预测基因A可能的功能。    二体外实验（细胞实验） 基因编辑：使用CRISPR-Cas9、siRNA等技术对基因A进行敲除、敲低或过表达，以观察细胞表型的变化。 表型分析：分析细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的变化，并通过多种实验方法（如流式细胞仪、划痕实验、Transwell迁移实验等）进行验证。 rescue实验：为了验证表型变化是由基因A直接引起的，可以进行rescue实验，即在敲除基因A的细胞中重新导入该基因，观察表型是否恢复。   三分子机制/信号通路研究 信号通路筛选：基于基因A的功能预测和已知研究，选择相关的信号通路进行筛选。 关键分子检测：通过Western Blot、qPCR等方...

蛋白质是由氨基酸组成，而氨基酸是由mRNA上的密码子（通常是3个碱基）编码的。因此，氨基酸的数量与编码蛋白质的基因中的碱基数目（或mRNA中的核苷酸数目）有直接关系。 但是，当我们说“蛋白大小”时，通常指的是蛋白质的分子量，而不是氨基酸的数量。 那么什么是蛋白质分子量呢？ 蛋白质的分子量（通常以kDa为单位）是蛋白质中所有原子质量的总和，包括构成它的所有氨基酸，以及其他可能存在的修饰基团（如糖基、磷酸基等）的质量。 所以仅仅用氨基酸数量去概括蛋白质大小是不对的。 为了快速估算蛋白质的分子量，经常使用一个平均的氨基酸分子量（如110 Da），来根据公式计算。 分子量＝氨基酸数目*110（平均分子量）/1000 举个例子：蛋白质有500个氨基酸 分子量 = 氨基酸数量 × 平均氨基酸分子量 ÷ 1000 = 500 × 110 Da ÷ 1000 = 55000 Da = 55 kDa 经过计算，可以得知，蛋白大小为55 kDa。 你搞清楚什么是蛋白大小吗？如果还不明白可以在留言区提问哦。 本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE...

在分子生物学研究中，RNA的提取是至关重要的一步，它直接影响到后续实验结果的准确性和可靠性。 对于不同类型的样本，如细胞、动物组织和血液，RNA提取过程中需要关注的细节和注意事项也各不相同。 动物组织 1、组织选取与保存： 因为RNA极易降解，所以首选新鲜组织进行RNA提取，同时保证组织块的清洁，没有血液、污物、粘液、食物、粪便等。 如果使用非新鲜组织，那么样本最好选择在-80℃冰箱或液氮中妥善保存且保存时间在三个月内的。 尽量避免组织的反复冻融，因为这同样会加速RNA的降解。 2、样本处理： 剪取组织时，避免组织长时间暴露于室温，应在冰盒上迅速操作，减少RNA降解的风险。 使用干净且经过消毒的剪刀和镊子剪取组织样本，确保从组织中央部位或新鲜切口处获取。 将剪下的组织充分剪碎，并立即放入无RNA酶的EP管中，加入适量的裂解液。确保剪碎的组织与裂解液充分接触，为后续匀浆做好准备。 3、组织量与裂解液匹配： 根据组织类型和成分调整剪取的组织量。对于含有大量蛋白、脂肪或紧密纤维组织的样本，比如肝脏，应适当减少组...