分子生物学



A260/A280、A260/A230比值偏低,主要的原因就是酚残留,别急着把样本丢弃,大可不必从头再来,下面教大家如何重新洗涤沉淀,得出理想的RNA纯度。
方法一:
如果是用Trizol提取RNA,最后得出来的OD值比较低,可以重新吸附、洗涤,注意是直接洗涤两次,之后离心时可以两次将 EP 管置于不同的方向,便于溶液中的各个部分都能得到充分的洗涤。
方法二:
加入0.1倍体积的3M sodium acetate以及3倍体积的冰乙醇,将混合物置于-80℃下冷藏过夜,第二天离心,之后再使用75%的冰乙醇洗涤沉淀物。
具体操作步骤:
①在不纯的RNA样本中加入0.1倍体积的3M 醋酸钠、2.5~3倍体积冰上预冷的无水乙醇(100%),旋涡充分混合。
②在-20℃下沉淀1小时或过夜,又或者在-80℃下沉淀一小时(如果RNA量很少,过夜放置可以产生更多沉淀)。
③4℃下最高速离心(13000rpm)30分钟
④用0.5 mL冰上预冷的75%乙醇洗涤RNA沉淀两次,每次在4℃下离心10分钟
⑤去除乙醇,吸走大部分乙醇后,可以快速离心(最高速度离心10秒),尽可能去除剩余的乙醇。
⑥风干沉淀并重悬于适当体积的无核酸酶水中。
如果RNA量较少,可以添加糖原帮助沉淀。在沉淀之前,在样本中加入1 μL 20mg/mL的糖原。
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