• 2025-11-28
    一般来说,提取出的RNA,最好马上做逆转录,毕竟RNA十分"娇弱",不知道什么时候就降解。如果没时间继续做下游实验,也可以暂时保存。问题来了,这个暂时是多久呢?按照温度,实验室样本的储存可以分为冷冻储存(-20°C)、超低温储存(-80°C)、深低温储存(-150 ~ -196°C)。 而RNA能保存多久,除了温度的因素还要考虑样本的质量。如果样本纯度高、完整性好,一般可以在4℃过夜,在-20℃可以保存一年。而-80°C超低温比较适合长期储存,对RNA的保护性也更强。 如果是有特殊的样本想要更长期保存,可以选择深低温储存(-150 ~ -196°C),样本在这一温度范围内其生物学活动极大降低,是保存样本中细胞活性的理想温度。 如何正确保存RNA?需要短期储存重悬的RNA时,最佳的选择是将其放置在-20°C的环境中。而如果需要进行长期储存,则应该选择-80°C的低温环境。在储存RNA时,为了避免RNA被降解,有条件的话,可以加入少量的RNA酶抑制剂,抑制RNA酶的活性,从而保护RNA免受降解。尤其要避免样本反复冻融,以免损伤RNA,还有RNA...
  • 2025-11-28
    RNA,全称为核糖核酸,负责在细胞中传递遗传信息。RNA由三个部分组成:磷酸、核糖和碱基。而碱基有四种:腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶。类型主要有8种,分别承担着不同的功能。 01mRNA(信使RNA)mRNA是一种参与蛋白合成的单链RNA。信使RNA由DNA转录而来,负责将遗传信息从细胞核传递到细胞质。在翻译过程中,核糖体根据mRNA序列翻译氨基酸序列。mRNA序列上每三个核苷酸代表一个密码子,核糖体读码mRNA上的密码子招募氨基酸,然后将这些氨基酸连接起来形成蛋白质。02tRNA(转运RNA)tRNA是一个小分子RNA,它的主要功能是携带氨基酸至核糖体,根据mRNA的序列密码子参与翻译蛋白质。03rRNA(核糖体RNA)rRNA是细胞中最为丰富的RNA,在分裂旺盛的细菌细胞中占80%以上.原核生物的rRNA可分为2类:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA;真核生物的rRNA可分为4类:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。在翻译过程中,需要rRNA参与起始、延伸和终止阶段。rRNA在翻译过程中与mRN...
  • 2025-11-28
    DNA和RNA虽然都是遗传物质,但是它们各有特色,其中最明显的一点就是它们的结构不同。DNA是双链结构,像拉链一样互相配对,所以它比较稳定,不容易被破坏。而RNA是单链结构,就像一条线一样,很容易被外部因素破坏。一种酶叫做RNase,它可以分解RNA,而且几乎无处不在,不仅存在于细胞内,还存在于各种体液中,包括唾液、汗液和皮肤。所以在提取RNA的过程中,如果没有做好全程无酶,RNA很容易被降解。 01注意个人穿着 穿着实验服、戴手套和口罩是基础措施,可以有效隔离样本与皮肤,避免唾液、汗液等体液的污染。尤其要注意,触摸皮肤、门把手及普通物体表面后要更换手套。 02保持环境清洁 对操作台喷洒RNA酶抑制剂喷剂,抑制环境中的RNase活性。 03实验耗材、试剂进行无酶无菌处理 有条件的话,可以使用一次性灭菌灭酶耗材,如果没有的话,需要对器材进行处理。使用0.1%的DEPC水进行浸泡处理24小时,然后再通过高压灭菌或干热灭菌法进一步去除DEPC。配置试剂所用的水也必须是经过无菌无酶处理的水,试剂不要和其他实验混用。 04...
  • 2025-11-28
    本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE
  • 2025-11-28
    GOONIE旗下的人/鼠/兔外周血淋巴细胞的分离液产品,在配方上进行了精细的优化和升级,确保其与目标样本的渗透压高度匹配,在细胞分离过程中最大程度地保护细胞的完整性和活性。基于密度梯度离心技术,能够精准地从人/鼠/兔的外周血、脐带血或骨髓样本中分离出淋巴细胞和单核细胞等关键细胞群体。 在离心过程中,细胞或液体在离心管内形成清晰的四层分布。产品优势人/鼠/兔外周血淋巴细胞分离液以其出色的性能与便捷的操作,为科研实验带来了革命性的改变。 1、操作简便:这款分离液的操作流程极为简化,仅需简单的移液和离心步骤,科研人员即可在短短一个小时内完成淋巴细胞的分离工作。2、高提取率:淋巴细胞分离的提取率高,让科研人员能够更加专注于后续的研究。3、品质保证:无需担心实验过程中的污染问题,可以更加放心地进行研究。经过精密的配方优化处理,确保了产品的无菌性,且内毒素含量低于行业标准的0.5EU/ml。4、应用多样:应用范围广泛,不仅适用于稀释后的抗凝血液样品,也能直接处理未经稀释的抗凝血液样品。无论是淋巴细胞的分离,还是血浆...
  • 2025-11-28
    否还记得那些被Western Blot(WB)实验支配的恐惧? 跑胶、转膜、洗膜……每一步都需小心翼翼, 生怕稍有差池就前功尽弃,测几个蛋白就要忙一周。 今天给大家介绍一款解放双手的蛋白检测技术——抗体芯片。 抗体芯片的优势: 高通量:一次实验,检测上百种指标,大大节省时间和精力。 操作简便:无需繁琐的跑胶、转膜等步骤,让实验变得更加简单高效。 适用性强:适用于人、小鼠、大鼠等多种种属,满足不同实验需求。 6月24日晚,我们将为大家带来一场抗体芯片专场直播! 在这场直播中、我们将深入剖析抗体芯片的工作原理、技术特点以及应用场景,让你全面了解它的优势和价值。了解到抗体芯片如何助力科研,让实验变得更加轻松、高效。 无论你是初学者还是资深研究者,都能在这里找到你想要的答案,更有机会赢取精美礼品哦!   转发留言有礼    活动一集赞领手机支架转发推文朋友圈集赞满10个,送小椅子手机支架,限定最先反馈前10位。活动二留言区抢楼有礼文章下方留言区评论,1楼、5楼、10楼、15楼,20楼各送EP管支架一个。(限定科研人员)礼品领取方式在...
  • 2025-11-28
    无论是提取RNA也好,还是细胞分离纯化,在各种需要离心的实验中,配平是必要的步骤,转速越高,对配平的要求就越高,为什么离心一定要配平呢? 1、损坏机器 离心的两个物体,重量不相等,很容易剧烈的震动。当离心机运行时,如果没有正确地进行配平,转轴会因为受到不均匀的力量而磨损。这样长时间下来,转子的磨损会越来越严重,离心机的寿命缩短。如果情况严重,还可能会让离心机直接损坏,要知道离心机的价格也是不便宜的。 2、威胁人身安全 如果离心机的不平衡值偏差过大,可能会对离心机造成直接损害,甚至对操作人员构成风险。比如,在高速运转状态下,转子因不平衡而脱离腔体,高速旋转产生的动能将转化为破坏力,严重威胁人员和设备的安全。 如何配平? 1、样品管内溶液相等 质量相等 确保样品管内溶液质量相等,当只有一个样品管需要离心时,为了确保转子的平衡,通常需要在转子的对称位置放置一个装有等质量清水的管子。 2、样品管对称放置 为了确保平衡,样品管必须中心对称放置,无论使用固定角转头还是水平转头。固定角转头要求样品管放置在以中心点对...
  • 2025-11-28
    启动子和起始密码子都是高中生物课本上的知识,有些人可能大学、研究生生阶段都没有完全搞清楚,今天给大家补补课。 1、启动子: 启动子是基因组中的一段DNA序列,位于基因的上游区域,属于基因的非编码区,通常位于转录起始点的附近。具有特定的结构和功能,能够与RNA聚合酶特异性结合,从而启动基因的转录过程。 但是启动子起到调控基因转录的作用,通过与RNA聚合酶结合,引导聚合酶准确地定位到基因的起始点,从而启动转录过程。 2、起始密码子: 起始密码子是指在蛋白质合成过程中,指示蛋白质起始的信使RNA(mRNA)分子中的一段特定的序列。这个序列会被翻译成蛋白质的第一个氨基酸。在不同类型的生物中,起始密码子的情况有所不同。 在细菌中,最常见的起始密码子是AUG/GUG(缬氨酸),编码N-甲酰甲硫氨酸(fMet)。 在真核生物(如人类、动物、植物等)中,起始密码子通常是AUG,编码甲硫氨酸。 这些起始密码子在DNA中对应的序列是ATG。当RNA聚合酶在转录DNA时,形成的mRNA中会出现起始密码子,这会指示蛋白质合成的起...
  • 2025-11-28
    在做实验过程中,有没有一种生搬硬套的感觉? 发现一部分科研人只懂操作,却不知道原理,只会机械化操作,导师问起来支支吾吾地说不出所以然来。今天分享一些Trizol提取RNA用到的试剂以及其对应原理,搞明白以后,万变不离其宗,相信实验时思路会打开很多。 PBS: 磷酸缓冲盐溶液,通常被用来清洗细胞,可以去除细胞表面的杂质和多余的RNA酶。 Trizol: 是一种混合化学物,主要成分包括:苯酚、8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇。各种成分相互作用能裂解样本释放出RNA,并抑制RNA酶,保护RNA的完整性。 苯酚: 裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放,缺点是不能完全抑制RNA酶的活性。 异硫氰酸胍: 作为一种强力的蛋白质变性剂,能够破坏细胞膜并释放细胞内的RNA,还可以抑制RNA酶的活性,防止RNA被降解。 8-羟基喹啉: 破坏RNA酶蛋白质中的二硫键,保护RNA不被降解。 β-巯基乙醇: 抑制RNA酶,与氯仿联用可增强抑制作用。 氯仿: 主要作用有两个,达到萃取的效果。 ①分层:加入氯仿,可以促使有机相和水...
  • 2025-11-28
    qPCR,即实时荧光定量PCR,主要用于检测基因的mRNA表达水平,从而了解该基因的转录情况。 WB,即Western Blot,是一种蛋白质检测技术,用于检测细胞或组织中特定蛋白的表达情况。主要目的是研究蛋白质的表达情况,包括蛋白质的是否表达,表达量多少,在不同样品中的表达差异。 两者分别检测的是RNA水平和蛋白水平,基因表达是一个复杂的过程,包括转录和翻译两个主要阶段,DNA通过转录变成mRNA,mRNA通过翻译变成蛋白质。 qPCR和WB是分别检测这两个水平的基因表达情况的技术方法,通过将两者结合使用,研究人员可以更全面地了解基因表达的情况,以及转录和翻译之间的关联。 通常情况下,qPCR和WB结果的数值或具体表达量不会完全相同,但在趋势上应该是一致的。 比如在qPCR实验中观察到某个基因的表达水平上调(即mRNA水平增加),那么在WB实验中,相应蛋白质的表达水平也应该呈现出上调的趋势。 同样地,如果qPCR显示基因表达水平下调(即mRNA水平减少),WB实验中蛋白质的表达水平也应该有类似的减少趋势。 但是有...