懂原理很重要！一文整理提取RNA试剂的作用

在做实验过程中，有没有一种生搬硬套的感觉？

发现一部分科研人只懂操作，却不知道原理，只会机械化操作，导师问起来支支吾吾地说不出所以然来。今天分享一些Trizol提取RNA用到的试剂以及其对应原理，搞明白以后，万变不离其宗，相信实验时思路会打开很多。

PBS：

磷酸缓冲盐溶液，通常被用来清洗细胞，可以去除细胞表面的杂质和多余的RNA酶。

Trizol：

是一种混合化学物，主要成分包括：苯酚、8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇。各种成分相互作用能裂解样本释放出RNA，并抑制RNA酶，保护RNA的完整性。

苯酚：

裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放，缺点是不能完全抑制RNA酶的活性。

异硫氰酸胍：

作为一种强力的蛋白质变性剂，能够破坏细胞膜并释放细胞内的RNA，还可以抑制RNA酶的活性，防止RNA被降解。

8－羟基喹啉：

破坏RNA酶蛋白质中的二硫键，保护RNA不被降解。

β-巯基乙醇：

抑制RNA酶，与氯仿联用可增强抑制作用。

氯仿：

主要作用有两个，达到萃取的效果。

①分层：加入氯仿，可以促使有机相和水相的分层，从而将RNA从有机相中分离出来。

②去杂：苯酚易溶于氯仿类有机溶剂，因此氯仿还可以将水相中的残留苯酚抽提掉，此外还能抽提样品中的一些脂溶性杂质。

异丙醇：

异丙醇的羟基具有极性，会抢夺RNA分子周围的水分子，从而使RNA析出，起到沉淀RNA的作用。

75%乙醇：

洗涤异丙醇、氯仿，还能溶解掉一部分的蛋白。由于乙醇具有很好的挥发性，通过自然挥发或离心等方法可以很容易地去除，从而得到较为纯净的RNA。

DEPC水：

DEPC水是经DEPC(即diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙)处理过并经高温高压灭菌的超纯水，可以与RNA分子结合，将其从细胞或组织中溶解出来。通过离心和洗涤等步骤，可以将DEPC水中的RNA与其他杂质分开，进一步纯化得到较纯的RNA。