为什么RNA总降解?5个无酶的基本要求,你做到了吗

作者: admin
发布于: 2025-11-28 11:01
分类: 实验方案

DNA和RNA虽然都是遗传物质,但是它们各有特色,其中最明显的一点就是它们的结构不同。DNA是双链结构,像拉链一样互相配对,所以它比较稳定,不容易被破坏。而RNA是单链结构,就像一条线一样,很容易被外部因素破坏。
一种酶叫做RNase,它可以分解RNA,而且几乎无处不在,不仅存在于细胞内,还存在于各种体液中,包括唾液、汗液和皮肤。所以在提取RNA的过程中,如果没有做好全程无酶,RNA很容易被降解。 

01

注意个人穿着

穿着实服、戴手套和口罩是基础措施,可以有效隔离样本与皮肤,避免唾液、汗液等体液的污染。尤其要注意,触摸皮肤、门把手及普通物体表面后要更换手套。

02

保持环境清洁

对操作台喷洒RNA酶抑制剂喷剂,抑制环境中的RNase活性。

03

实验耗材、试剂进行无酶无菌处理

有条件的话,可以使用一次性灭菌灭酶耗材,如果没有的话,需要对器材进行处理。使用0.1%的DEPC水进行浸泡处理24小时,然后再通过高压灭菌或干热灭菌法进一步去除DEPC配置试剂所用的水也必须是经过无菌无酶处理的水,试剂不要和其他实验混用。

04

注意操作温度和时间

在提取RNA时,为减少RNA酶的影响,应特别注意操作温度和时间。高温可以破坏酶的结构,而缩短操作时间则能降低酶与RNA接触的机会。如果是要保存的话,应该将提取出的RNA分装后于-80℃长期保存或-20℃短期保存,避免反复冻融。

05

保证样本的新鲜

一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理(液氮速冻)。

想要提取出高浓度、高纯度的RNA,选择合适的试剂是关键。GOONIE的RNA提取试剂盒,简化了提取的流程,一个试剂盒轻松搞定,翻车率低,提取出的RNA纯度高,(A260/A280=2,A260/A230=2)左右

和传统的trizol提取RNA相比,GOONIE的试剂盒不含苯酚,无需氯仿,不用到有毒试剂,无异味,更安全。操作简单,整个流程大概只需要15分钟左右。

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本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE
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