提取细胞、动物组织、血液的RNA要注意什么?高质量提取试剂盒包邮试用

作者: admin
发布于: 2025-11-28 10:51
分类: 实验方案

在分子生物学研究中,RNA的提取是至关重要的一步,它直接影响到后续实验结果的准确性和可靠性。


对于不同类型的样本,如细胞、动物组织和血液,RNA提取过程中需要关注的细节和注意事项也各不相同。


动物组织


1、组织选取与保存:

因为RNA极易降解,所以首选新鲜组织进行RNA提取,同时保证组织块的清洁,没有血液、污物、粘液、食物、粪便等。

如果使用非新鲜组织,那么样本最好选择在-80℃冰箱或液氮中妥善保存且保存时间在三个月内的。

尽量避免组织的反复冻融,因为这同样会加速RNA的降解。

2、样本处理:

剪取组织时,避免组织长时间暴露于室温,应在冰盒上迅速操作,减少RNA降解的风险。

使用干净且经过消毒的剪刀和镊子剪取组织样本,确保从组织中央部位或新鲜切口处获取。

将剪下的组织充分剪碎,并立即放入无RNA酶的EP管中,加入适量的裂解液。确保剪碎的组织与裂解液充分接触,为后续匀浆做好准备。

3、组织量与裂解液匹配:

根据组织类型和成分调整剪取的组织量。对于含有大量蛋白、脂肪或紧密纤维组织的样本,比如肝脏,应适当减少组织量。

4、匀浆方法:

在条件允许的情况下,使用高通量组织匀浆机进行匀浆,以获得更好的匀浆效果。如果没有该设备,可以采用其他方法,但需要注意避免RNA的降解和损失,研磨不彻底会影响RNA的得率和质量。

5、RNA保存与操作:

提取后的RNA应立即置于冰上,并在整个实验过程中保持低温状态,以防止RNA的降解。

避免RNA长时间暴露于空气中,使用无RNA酶的试剂和耗材,以防止RNA的污染。


细胞


1、悬浮细胞:

悬浮细胞经离心后,应弃去培养基,并以无菌PBS轻柔洗涤一至两次,以去除残留物。随后,利用适量PBS重新悬浮细胞,确保其均匀分散。

不要没有重悬,直接加裂解液,可能会导致细胞表层的组蛋白释放并包裹沉淀细胞,阻碍裂解液的有效渗透,使得细胞裂解不充分,进而影响RNA的提取纯度和产量。

2、半贴壁或贴壁不紧的细胞:

对于半贴壁或贴壁不紧密的细胞,处理时首先需弃去培养基,随后用PBS清洗一至两次以去除残留物。接着,利用吸管或移液枪吸取适量PBS,轻柔吹打培养皿,使细胞从皿底脱落。

随后,将含细胞的PBS悬液转移至无RNA酶的EP管中,并加入裂解液进行细胞裂解和RNA提取。

这一过程中,确保操作轻柔且避免细胞损失,以保证RNA提取的效率和纯度。

3、贴壁细胞:

对于贴壁细胞的处理,首先需使用胰酶进行消化,以便于细胞从培养皿底部分离。随后,将消化后的细胞悬液收集至无RNA酶的EP管中,并进行离心操作去掉上清液中的胰酶和其他杂质。

确保去掉多余的胰酶,接着,用PBS对细胞进行轻柔的清洗一至两次。清洗完成后,用适量的PBS重新悬浮细胞,确保细胞均匀分散。最后,按照既定的提取步骤,继续进行RNA的提取工作。

整个过程中,需保持操作的准确性和轻柔性,以确保细胞的完整性和RNA的提取效率。


血液

血液跟普通的细胞样本不同,其中含有的血浆、红细胞,使得样本成分更加复杂, 提取的难度也相对较大。

全血样本含有众多红细胞,而红细胞中RNA数量少,因此在提取 RNA 之前通常需要先去掉红细胞。

RNA 容易被血液中的酶降解,因此在采集和保存全血样本时需要注意防止 RNA 的降解。 

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