无论是提取RNA也好，还是细胞分离纯化，在各种需要离心的实验中，配平是必要的步骤，转速越高，对配平的要求就越高，为什么离心一定要配平呢？ 1、损坏机器 离心的两个物体，重量不相等，很容易剧烈的震动。当离心机运行时，如果没有正确地进行配平，转轴会因为受到不均匀的力量而磨损。这样长时间下来，转子的磨损会越来越严重，离心机的寿命缩短。如果情况严重，还可能会让离心机直接损坏，要知道离心机的价格也是不便宜的。 2、威胁人身安全 如果离心机的不平衡值偏差过大，可能会对离心机造成直接损害，甚至对操作人员构成风险。比如，在高速运转状态下，转子因不平衡而脱离腔体，高速旋转产生的动能将转化为破坏力，严重威胁人员和设备的安全。 如何配平？ 1、样品管内溶液相等 质量相等 确保样品管内溶液质量相等，当只有一个样品管需要离心时，为了确保转子的平衡，通常需要在转子的对称位置放置一个装有等质量清水的管子。 2、样品管对称放置 为了确保平衡，样品管必须中心对称放置，无论使用固定角转头还是水平转头。固定角转头要求样品管放置在以中心点对...

启动子和起始密码子都是高中生物课本上的知识，有些人可能大学、研究生生阶段都没有完全搞清楚，今天给大家补补课。 1、启动子： 启动子是基因组中的一段DNA序列，位于基因的上游区域，属于基因的非编码区，通常位于转录起始点的附近。具有特定的结构和功能，能够与RNA聚合酶特异性结合，从而启动基因的转录过程。 但是启动子起到调控基因转录的作用，通过与RNA聚合酶结合，引导聚合酶准确地定位到基因的起始点，从而启动转录过程。 2、起始密码子： 起始密码子是指在蛋白质合成过程中，指示蛋白质起始的信使RNA（mRNA）分子中的一段特定的序列。这个序列会被翻译成蛋白质的第一个氨基酸。在不同类型的生物中，起始密码子的情况有所不同。 在细菌中，最常见的起始密码子是AUG/GUG（缬氨酸），编码N-甲酰甲硫氨酸（fMet）。 在真核生物（如人类、动物、植物等）中，起始密码子通常是AUG，编码甲硫氨酸。 这些起始密码子在DNA中对应的序列是ATG。当RNA聚合酶在转录DNA时，形成的mRNA中会出现起始密码子，这会指示蛋白质合成的起...

在做实验过程中，有没有一种生搬硬套的感觉？ 发现一部分科研人只懂操作，却不知道原理，只会机械化操作，导师问起来支支吾吾地说不出所以然来。今天分享一些Trizol提取RNA用到的试剂以及其对应原理，搞明白以后，万变不离其宗，相信实验时思路会打开很多。 PBS： 磷酸缓冲盐溶液，通常被用来清洗细胞，可以去除细胞表面的杂质和多余的RNA酶。 Trizol： 是一种混合化学物，主要成分包括：苯酚、8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇。各种成分相互作用能裂解样本释放出RNA，并抑制RNA酶，保护RNA的完整性。 苯酚： 裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放，缺点是不能完全抑制RNA酶的活性。 异硫氰酸胍： 作为一种强力的蛋白质变性剂，能够破坏细胞膜并释放细胞内的RNA，还可以抑制RNA酶的活性，防止RNA被降解。 8－羟基喹啉： 破坏RNA酶蛋白质中的二硫键，保护RNA不被降解。 β-巯基乙醇： 抑制RNA酶，与氯仿联用可增强抑制作用。 氯仿： 主要作用有两个，达到萃取的效果。 ①分层：加入氯仿，可以促使有机相和水...

qPCR，即实时荧光定量PCR，主要用于检测基因的mRNA表达水平，从而了解该基因的转录情况。 WB，即Western Blot，是一种蛋白质检测技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白的表达情况。主要目的是研究蛋白质的表达情况，包括蛋白质的是否表达，表达量多少，在不同样品中的表达差异。 两者分别检测的是RNA水平和蛋白水平，基因表达是一个复杂的过程，包括转录和翻译两个主要阶段，DNA通过转录变成mRNA，mRNA通过翻译变成蛋白质。 qPCR和WB是分别检测这两个水平的基因表达情况的技术方法，通过将两者结合使用，研究人员可以更全面地了解基因表达的情况，以及转录和翻译之间的关联。 通常情况下，qPCR和WB结果的数值或具体表达量不会完全相同，但在趋势上应该是一致的。 比如在qPCR实验中观察到某个基因的表达水平上调（即mRNA水平增加），那么在WB实验中，相应蛋白质的表达水平也应该呈现出上调的趋势。 同样地，如果qPCR显示基因表达水平下调（即mRNA水平减少），WB实验中蛋白质的表达水平也应该有类似的减少趋势。 但是有...

qPCR即通过PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，从而实现对起始模板定量及定性的分析。那么忙活了一两天，好不容易做完了qPCR，如何才能判断数据能不能用呢？教大家从三个方面来判断。  省流版答案： 1、Ct值12~182、 2、熔解曲线: ①TM值在80-90之间 ②单峰无杂峰，且尖锐 ③峰距在5个TM内最优 3、扩增曲线: ①曲线具有平台期 ②Fluorescence至少在3以上 ③曲线无二次抬头一、看Ct值范围是否理想  Ct值是指阈值循环数，C代表Cycle（循环），t代表threshold（阈限）。 在PCR（聚合酶链式反应）检测中，DNA的复制都需要经过多个循环，每一个循环都会产生新的DNA。 而这个荧光信号，其实就是在每一个循环中，随着DNA的复制数量增加，其积累到一定程度时所发出的信号。这个信号会随着循环的增加而增强，直到达到设定的阈值，这个阈值就是阈限。 数据的代表含义： 如果一个样本中目的基因片段的浓度越高，那么在同样的时间内，DNA复制的数量就会越多，荧光信号达到阈值所需的循环数就越少。反之，如果目的基因的浓度越低，...

琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验室中分离鉴定核酸的常规方法，核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中(pH约8.5)，核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。 通过电泳技术，可以分离出不同大小和构象的RNA分子，并通过观察条带的数量、大小和形态，可以判断出RNA分子的完整性。 而在这个过程中，电泳缓冲液的主要作用就是保持pH，并使溶液具有一定的导电性。 TAE和TBE是比较常用的缓冲液，它们到底有什么区别呢？ TAE缓冲液 制备办法：1X TAE缓冲液：40mMTris-acetate，1mMEDTA，pH 8.2 – 8.4（在25°C下）优点： ①对于大于13kb的DNA片段，TAE缓冲液能取得更好的分离效果。 ②在TAE缓冲液中，DNA的超螺旋状态在电泳过程中能够更好地保持其真实的相对分子质量。 ③适用于回收DNA片段，后续进行酶切反应等 缺点： 缓冲容量小，TAE缓冲液在长时间电泳过程中可能会逐渐失去其pH缓冲能力，导致pH值发生变化。 TBE缓冲液 制备办法：1XTBE: 89 mM Tris,89mM boric acid,2 mM EDTA PH...