在qPCR实验前清除RNA中的gDNA,主要是为了确保qPCR检测到的信号完全来自于目标RNA(cDNA),而不是被残留的gDNA所污染,从而保证定量结果的准确性和可靠性。 逆转录原理图 qPCR原理图 qPCR如果不去gDNA会检测到什么? qPCR的目标:定量检测特定的cDNA序列,该cDNA是由我们感兴趣的mRNA通过逆转录而来的。 但是基因组DNA(gDNA)也包含我们所检测基因的序列。 如果RNA样品中混有gDNA: qPCR的引物无法区分它们是要结合到cDNA上还是gDNA上。 引物会同时与cDNA和gDNA结合并进行扩增。 这样,最终检测到的荧光信号就是 “cDNA信号 + gDNA信号”的总和。 gDNA污染会直接导致定量结果出现严重偏差定量值假性偏高: 这是最直接的影响。检测的基因表达量会比实际值高,因为一部分信号来自于“背景噪音”gDNA。 数据失真,无法反映真实生物学差异: 假设你比较实验组和对照组的某个基因表达量。如果两个样品的gDNA污染程度不同(这在处理样品时很常见),那么你观察到的表达差异可能根...