DEPC水如何抑制RNase？怎么配？一次性总结

在分子生物学实验中，当研究人员历经艰辛从细胞中提取出珍贵的RNA后，所做的第一个关键步骤往往就是：将其溶解在DEPC水中。

此外，配制电泳缓冲液、稀释试剂乃至清洗实验器皿，都离不开它。

DEPC水可以为脆弱的RNA分子创造一个安全的环境，彻底清除无处不在的“RNA杀手”——RNase。

那么，DEPC水是如何抑制RNase的呢？

DEPC是什么？ 它的中文全名是焦碳酸二乙酯，是一种非常活跃的有机化合物。在常温下，它呈无色液体状。

那么我们要如何制备呢？ 研究发现0.1%的DEPC即可起到抑制RNase的作用。

将0.1%（v/v）的DEPC加入水中。即比如在水中加入1mL的DEPC制备成1000mL的DEPC水，就可以制备DEPC水。

DEPC呈有机物状态，加入水中以后，无法与水马上相溶，需要充分混合。

通常可以用电动搅拌仪和搅拌子在室温搅拌数小时或过夜，让DEPC与水相溶，与潜在RNase充分反应。

最后，有一个至关重要的步骤：必须通过高温高压灭菌处理，以去除水中未反应的DEPC。因为DEPC本身也会破坏后续实验中的蛋白质（如逆转录酶、聚合酶等）。进行15分钟/升的高压灭菌后就可以充分灭活DEPC。

无处不在的“破坏王”：RNase极其稳定，生命力顽强。它广泛存在于我们的皮肤、唾液、汗液、细菌和真菌中。这意味着实验操作中一个不经意的呼吸、一次徒手的接触，都可能导致RNase污染。

惊人的稳定性：许多RNase非常“耐打”，即使经过高温煮沸或变性剂处理，在条件适宜时也可能恢复部分活性，很难彻底清除。

RNA实验的“天敌”：在提取、保存和操作RNA的过程中，如果RNase污染，它就会迅速地将完整的长链RNA切割成碎片，导致RNA降解。

DEPC 可以和 RNase 分子反应中心的氨基酸发生不可逆反应，从而抑制酶活性。

它与组氨酸残基的反应最强烈，但也可与赖氨酸、半胱氨酸和酪氨酸残基反应，使水中的 RNase 失活。