分子生物学



核酸电泳实验中,一般需要将核酸和上样缓冲液按照一定的比例,添加到样品槽中,然后才能开启电泳。大家有没有想过核酸要加loadingbuffer才能跑胶呢?
样品本身的密度通常低于电泳槽中的电极缓冲液,如果直接将低密度的样品加入上样孔中,样品可能会漂浮、扩散,无法有效地沉入孔底,导致上样不均匀、样品溢出孔外甚至完全无法上样。
Loading Buffer 中含有高浓度的甘油或蔗糖,它们大大增加了样品的密度,使样品能够沉入上样孔的底部,形成清晰、集中的样品层。
Loading Buffer 含有追踪染料,比如GelRed。
指示上样: 染料的颜色使操作者能清晰地看到样品是否被准确加入上样孔中,避免漏加或错加。
监控电泳进程: 通过观察染料迁移的位置,可以判断电泳是否正在进行以及大概的进度,避免样品跑出凝胶。
很多核酸Loading Buffer含有低浓度的EDTA(乙二胺四乙酸),可以抑制DNase的活性,防止样品中的核酸在电泳前或电泳过程中被降解。
Buffer本身也提供一定的缓冲能力(通常pH在8.0左右),有助于维持核酸的稳定性。
