产品简介

本产品采用经典的碱裂解法，通过柱式法的硅胶膜技术与改良的除内毒素液，可用于从 100~300 mL 过夜培养的菌液中提取高质量的质粒，有效去除质粒中残留的内毒素，纯度高。操作简便快捷，可快速提取 0.2~1.5 mg 质粒 DNA。

提取的质粒 DNA 中残留的内毒素含量极低（＜0.1 EU/μg），可直接用于细胞转染、动物注射、酶切、PCR、测序等实验。

效果实测

产品组成

储存条件

本产品的溶液L 置于2~8℃储存，其他组分室温储存。若RNase A 已全部加入溶液P1 中且混匀，需将溶液 P1 储存于2~8℃，有效期 6 个月。常温运输。

使用演示

实验前准备

1、首次使用前，将 RNase A 全部加入至溶液 P1 中，混匀后做上标记。

2、准备 2/50 mL 离心管、80%乙醇等。

使用方法

1、按需取100 ~300 mL过夜培养的菌液于50 mL离心管中 ， 12000×g离心1 min收集菌体（菌液较多时可通过多次离心将菌体沉淀收集于同一离心管） ，吸弃液体 ，液体要弃尽。

2、依次加入8 mL溶液P1（已含RNase A）和160 μL溶液L ，涡旋菌体直至完全重悬。

注意：如果菌体未能全部重悬散开 ，会影响下一步的碱裂解 ，进而影响质粒的提取产量。溶液L可以提升质粒的提取产量 ，请先在离心管里加入溶液P1 ，再将160 μL溶液L打到溶液P1内 ，以免损耗。

3、加入8 mL溶液P2 ，温和地上下颠倒8次 ，室温静置4 min（不应超过5 min）。

注意：此步切勿剧烈震荡 ，应温和地混合 ，避免残留基因组DNA。裂解时间不应超过5 min ，避免质粒受到破坏 ，此时的菌液应变为清亮黏稠 ，若菌液仍未清亮 ，可能是菌体过多 ，裂解不彻底 ，应减少菌体量。

4、加入8 mL溶液P3 ，立即上下颠倒15次 ，此时应出现白色絮状沉淀 ， 12000 ×g离心15 min。

注意：溶液P3加入后应立即混匀 ，避免产生局部沉淀。

5、将上清液转移至新的50 mL离心管中 ，加入0.5倍上清液体积的除内毒素液 ，上下颠倒15次以至混匀。

6、将步骤5的混合液转移至吸附柱（已放入收集管） 中 ， 12000 ×g离心1 min ，弃滤液。

注意：吸附柱的最大承载容积是14.5 mL ，若混合液超过该体积 ，需分多次上柱。

7、重复步骤6 ，直至混合液全部上柱。

8、加入10 mL除蛋白液至吸附柱中 ，室温静置1 min ， 12000×g离心1 min ，弃滤液。

9、加入12 mL 80%乙醇至吸附柱中 ，室温静置1 min ， 12000×g离心1 min ，弃滤液。

10、将吸附柱放回收集管中 ， 12000 ×g离心2 min。

11、将吸附柱放入新的收集管中 ，加入1 ~2 mL ddH2O至吸附柱的膜中央 ，室温静置2 min ， 12000×g离心2 min ，弃吸附柱。

12、提取的质粒DNA于-20℃保存。

注意事项

1、溶液 P2 在低温时会有沉淀析出，若有沉淀析出，将其置于 37℃中复溶至溶液澄清后方可使用。

2、各组分使用后应及时盖紧盖子，避免长时间暴露于空气中导致醇挥发、pH 值变化等。