在生物化学与分子生物学研究中,Western Blotting(WB)技术作为研究蛋白质表达的关键手段,其步骤的精确性和试剂的选择对实验结果至关重要。传统的WB实验中,甲醇在转膜步骤中扮演着重要角色,尤其是用于PVDF膜的激活。然而,甲醇的使用也伴随着一系列局限性和健康风险。 WB实验流程图 ①PVDF膜为什么要用甲醇激活? PVDF(偏聚氟乙烯)膜因其优良的机械强度和蛋白质结合能力,在WB实验中广泛应用。然而,原始的PVDF膜是高度疏水的,不利于蛋白质在其表面的吸附和转移。甲醇激活PVDF膜的过程主要通过以下几个机制发挥作用: 去除生产残留物与污染物:甲醇能有效去除PVDF膜表面的生产残留物和储存相关的污染物,这些残留物可能会干扰蛋白质的有效转移和检测。增加膜的亲水性:甲醇处理可以改变PVDF膜的表面特性,使其从疏水变为亲水。亲水性的增加有助于膜更好地吸附水基介质中的蛋白质,提高转膜效率。去除SDS并改善蛋白质结合:SDS-PAGE电泳过程中,蛋白质表面包裹SD...