WB第一步就错？别让错误内参毁了你的实验

作者： admin

发布于： 2025-11-28 10:38

分类：实验方案

做wb应该选什么做内参？

在Western Blot实验中，内参蛋白的选择对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。内参蛋白通常是一些管家基因编码的蛋白，它们的表达比较相对恒定。我们可以通过观察内参蛋白的结果，来判断实验是否可信。

比如，目的蛋白没有条带，就可以看看内参基因，如果内参有条带就说明实验操作和样本是没问题的，可能是目的蛋白不表达，或者目的蛋白的抗体有问题。

比如，目的蛋白的条带很浅，但是内参蛋白条带已经很浓，说明可能是目的蛋白的表达比较少。

如果连内参蛋白都没有条带，就可能是实验操作有问题，比如转膜失败了，或者样本降解了。

内参蛋白的选择原则：

1.蛋白表达的稳定性：通常选择恒定表达的管家基因编码的蛋白，它们一般不会因为细胞的衰老、加药、基因敲除或者环境改变等问题影响表达。

2.分子量差异：内参蛋白的分子量不能跟目标蛋白的分子量太接近，否则可能会重叠在一起无法分辨。

3.细胞定位匹配：内参蛋白的亚细胞定位需要跟目标蛋白一致。例如，如果目标蛋白位于细胞核，应选择核蛋白内参（如Histone H3或Lamin B）；如果目标蛋白位于细胞质，可选择β-actin或GAPDH。

常见内参蛋白的大小跟应用场景