转染质粒必须去除内毒素吗？4个潜在风险不容忽视

细胞莫名死亡、转染效率忽高忽低、动物模型炎症频发......你的转染实验是否总在重复这些问题？可能你忽略了一个隐形杀手：内毒素。

内毒素是转染实验中的“沉默破坏者”，尤其对原代细胞、体内实验和精密研究堪称致命。

内毒素（Endotoxin）是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖（LPS）成分，在质粒提取过程中极易残留。

1、细胞死亡：实验还没开始就结束了

典型现象：

转染后24-48小时细胞大量死亡（空泡化、贴壁脱落）、悬浮细胞聚集成团

2、转染效率跳水

● 转染效率对比实验：

● 原因：内毒素与DNA竞争结合转染试剂（如脂质体），形成无效复合物

3、 实验数据忽高忽低、长期实验不可重复

○ 使用普通质粒：Western Blot目标蛋白条带强度波动、荧光素酶报告基因检测背景值升高

○ 溯源发现是由于不同批次质粒内毒素含量差异造成的

4、动物实验系统性风险

● 体内影响：

○ 引发全身炎症（发热、肝损伤标志ALT/AST升高）；

○ 加速质粒清除，缩短目标基因表达时长；

○ 病理切片显示组织炎性浸润（如肝、肺）。

内毒素对实验结果的影响绝非“可接受误差”，而是从细胞活性、基因表达、动物反应到数据可信度的全方位破坏。选择专业级去内毒素质粒，本质上是为科研投入购买“保险”——用可控的前期成本，规避难以估量的隐性风险。

1、使用去内毒素质粒提取试剂盒

通过离子交换层析或亲和层析特异性去除LPS（如信天翁无内毒素质粒小提试剂盒，货号400-201）。

优势：操作简便，适用于常规实验，内毒素含量可降至 <0.1 EU/μg DNA。

2、Triton X-114相分离法

原理：利用Triton X-114在低温下的两相分离特性，将LPS分配至胶束相中。

适用场景：适用于实验室自主纯化，需结合超速离心或过滤步骤。

3、高效液相色谱（HPLC）纯化

通过分子筛或反相色谱进一步去除微量LPS残留。

特点：成本较高，适用于高灵敏度实验（如体内基因治疗）。

4、内毒素吸附剂处理

使用多粘菌素B包被的磁珠或树脂特异性结合LPS