如何高效分离PBMC？超详细步骤解析，实验室新手必备！

20世纪中期，科学家们对免疫系统的研究日益深入，但如何从血液中高效分离单核细胞和淋巴细胞成为难题。血液成分复杂，传统方法效率低，难以满足科研需求。

1968年，挪威科学家Arne Bøyum博士发明了一种简单高效的方法。他利用密度梯度离心原理，发现红细胞和多形核白细胞（PMN）密度较高（>1.077 g/mL），而单核细胞和淋巴细胞密度较低（<1.077 g/mL）。

基于此，他设计了一种密度为1.077 g/mL的等渗分离液。离心后，红细胞和PMN沉底，单核细胞和淋巴细胞则停留在分离液与血浆界面，形成“白膜”。

Bøyum博士将这一方法公开发表，造福全球科研界。信天翁GOONIE人淋巴细胞分离液正是基于他的方法开发集成，为科研提供了高效、可靠的细胞分离工具。

1.即用型设计：无需额外配制，开瓶即用，简化实验流程。

2.高效分离：密度为1.077±0.001 g/mL，确保单个核细胞的高效分离。

3.无菌处理：通过内毒素检测（<0.5 EU/mL），适合细胞培养等实验操作。

4.广泛适用：适用于人外周血、脐带血和骨髓样本的淋巴细胞分离。

5.稳定性强：可在4℃~30℃避光保存，保质期长达3年。

 STEP 1：血液采集与稀释

采集新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂均可）。

用等体积的PBS或生理盐水稀释全血，确保细胞分离效果。

STEP 2：铺液与离心

在离心管中加入适量分离液（总体积不超过离心管的三分之二）。

将稀释后的血样沿管壁缓慢加入分离液上方，保持两液面界面清晰。（注意：分离液、抗凝未经稀释全血、等渗溶液（PBS 或生理盐水）体积）为 1:1:1。

在室温下，使用水平转子以700g~800g离心20~30分钟。

STEP 3：收集PBMC

离心后，管底为红细胞，中间层为分离液，最上层为血浆/组织匀浆层。

血浆层与分离液层之间是一层薄而致密的白膜，即单个核细胞（PBMC）层。

用移液管小心吸取白膜层到另一离心管中。

STEP 4：洗涤细胞

用PBS或生理盐水稀释细胞悬液，室温下以250g离心10分钟，弃上清。

重复洗涤1~2次，以去除残留的分离液和杂质。

STEP 5：重悬细胞

用PBS、生理盐水或培养基将细胞重悬，即可用于后续实验。

1.恢复室温：使用前请将分离液放置至室温（18℃~25℃），并轻轻颠倒混匀。

2.无菌操作：全程需无菌操作，避免细胞污染。

3.样本新鲜度：为了保持淋巴细胞的活性，血液样本最好为健康人新鲜外周血。

4.红细胞污染：单个核细胞悬浮液中可能含有少量的红细胞，一般不影响下游。

免疫学研究：分离淋巴细胞用于免疫细胞功能分析。

分子生物学实验：分离的细胞可用于RNA、DNA提取等实验。