流式细胞仪吸不上细胞怎么办？

流式细胞仪作为细胞分析的核心工具，其运行稳定性直接影响实验成败。当仪器无法正常吸取细胞时，不仅会延误实验进度，还可能因反复排查消耗大量样本。本文将系统解析吸样失败的常见原因及解决方案。

一、样本问题

1. 细胞悬液浓度异常

a. 问题：细胞浓度过低吸样时负压不足，导致仪器反复“空吸”或触发报警。或过高细胞黏连成片，引发管路黏滞性堵塞。
¡ 隐藏风险：某些凋亡细胞或碎片即使浓度达标，仍可能因黏附性增强引发堵塞。
b. 解决：调整浓度，必要时用PBS稀释或离心浓缩。

2. 细胞团块或杂质堵塞

a. 问题：
¡ 机械损伤：移液操作过于剧烈导致细胞破裂，释放DNA形成网状团块。
¡ 死亡细胞聚集：长时间静置样本中死细胞相互黏附。
b. 解决：使用细胞滤网过滤样本，常规用40 μm尼龙滤网；处理原代细胞或脆弱细胞时，可选用70 μm滤网减少剪切力。细胞离心后轻柔重悬，避免剧烈震荡。

 
细胞滤网

3. 样本管适配性差

a. 问题：非专用管（如EP管）规格不匹配，导致吸样针无法有效接触管底残留样本。
b. 解决：更换仪器适配的流式专用管，确保管盖密封性。

4. 样品离心步骤不当

a. 离心速度过高：如误设rpm而非rcf，导致细胞破碎。离心时间过长：原代细胞离心超过10分钟易导致膜结构损伤
b. 规范：根据细胞类型调整离心力（通常500×g以下），离心后检查沉淀完整性。

5. 低级错误

a. 最夸张的原因，就是没有往试管中加样本，或者错把PBS加成为蒸馏水，导致细胞全部裂掉，或者错加了10×PBS。

二、硬件故障

1. 吸样针或管路堵塞

a. 现象：吸样针出水异常（如气泡或断流）。残留细胞或缓冲液结晶堵塞管路。
b. 处理：
   i. 清洗：用10%次氯酸钠或酶清洗液浸泡吸样针10分钟，后以去离子水冲洗。
   ii. 疏通：注射器连接吸样针反向抽吸，或超声波清洗（需专业人员操作）。
c. 预防：实验后运行自动清洗程序，避免残留样本干涸。

2. 鞘液系统异常

a. 问题：鞘液不足、废液罐满载或管路扭曲，导致负压失衡。
b. 解决：补充鞘液、排空废液罐，检查管路通畅性。

3. 压力系统故障

a. 表现：真空泵异常、密封圈老化或阀门漏气。仪器运行时出现间歇性“嘶嘶”漏气声。
b. 应对：重启仪器校准压力参数，若无效需联系工程师更换密封部件。

维护建议：延长仪器寿命

• 日常保养：每周清洁光路、每月校准激光器、每季度更换滤芯。
• 耗材选择：使用原厂试剂与耗材（如鞘液、清洗液），避免兼容性问题。
• 数据记录：建立维护日志，记录故障现象与处理方案，便于追踪高频问题