质粒转染到细胞中,需要确保质粒无菌吗?

作者: admin
发布于: 2025-11-28 09:53
分类: 实验方案

简短的回答是:是的,需要确保质粒无菌。但是其实使用商业化的试剂盒,并不需要特意保证无菌环境,只要确保最后的洗脱液和ep管干净,就不会污染细胞。



为什么在普通实验台上操作,
最终质粒却不污染细胞?

01

纯化柱可以去杂质


质粒提取试剂盒(特别是无内毒素质粒提取试剂盒)的核心是吸附柱。在结合和洗涤步骤中,缓冲液的设计使得只有质粒DNA能高效地结合到膜上,蛋白质、代谢物、盐离子等杂质会被洗掉。

细菌碎片和内毒素在这些步骤中也被有效地去除了。 即使你在有菌环境下裂解细菌,这些污染物也不会被纯化柱捕获,而是在弃去的滤液和洗涤液中。

02

乙醇洗脱


虽然裂解、中和等前期步骤在非无菌环境下进行,但通常会用含有70%-80%乙醇的洗液洗涤。这个过程能进一步去除盐分和杂质,并且乙醇本身就有杀菌作用。洗涤后,可以保证最终收集到的质粒溶液是无菌的。

03

耗材和溶菌液无菌


经过前面系列洗涤纯化纯化柱基本已经不含其他杂质接下只要保证洗脱过程洗脱液接触耗材干净提取质粒就是无菌



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本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE
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