货号：400-107

产品保存

HAR Buffer 1存储条件为4℃；其余组分均可室温（15-25℃) 存储，保质期为一年。室温运输。

产品简介

本产品适用于各种类型土壤和粪便样品的总RNA提取。本试剂盒将硅胶柱纯化技术与高效的腐殖酸去除方案   相结合，能够高效的去除腐殖酸等抑制因子获得高质量的RNA 。所得RNA产物可直接用于PCR和qPCR等实验。

优越性能

步骤简单，节省时间

不同土壤样本腐殖酸去除效果明显

GOONIE土壤 RNA 提取试剂盒去除腐殖酸的效果更突出。

产品组成

用户自备

试剂：无水乙醇、水饱合酚。

仪器及耗材：台式高速离心机、涡旋仪、珠磨仪（推荐使用）、2 mL 和1.5 mL RNase Free离心管。

实验前准备

按照下表提示，使用【无水乙醇】对Washing Buffer 1和Washing Buffer 2进行稀释，稀释后室温保存。

HAR Buffer 2A 是白色固体悬浊液，使用前摇匀吸取即可；

当贮存温度较低时，SRL buffer易析出沉淀，请在使用前把整瓶试剂置于55℃中至沉淀完全溶解，充分混 匀后再使用；

CFS buffer含有低毒性的有机化合物，具有一定的挥发性，请置于干燥且通风良好处存储；

使用说明

1. 分别称量200 mg 玻璃珠1和玻璃珠2到2 mL离心管中，再加入0.5 g土壤样品。
2. 往离心管中分别加入500 μLSRL buffer、40 μL HAR Buffer1 、400 μL水饱和酚（需自备）和400 μL CFS buffer到样品中，高速涡旋10 min；为了获得更好的效果，建议使用珠磨仪，例如：FastPrep-24。
3. 室温条件下13,000 g离心5 min。
4. 分别加入70 μL HAR Buffer 2A和HAR Buffer 2B到新的2 mL离心管中，然后加入350μL上清液，涡旋混匀，冰上静置3 min。
5. 室温条件下13,000 g 离心2 min，小心转移350 μL上清液到新的2 mL 离心管中。
6. 加入等体积DNA Binding Buffer，涡旋混匀。
7. 将DNA吸附柱套入收集管中，转移第6步混合液到结合柱中，室温13,000 g 离心30 sec，弃结合柱，保留滤液。
8. 往滤液中加入等体积的RNA Binding Buffer，吸打混匀。
9. 将RNA吸附柱套入新的收集管中，转移第8步中的混合液700 μL到结合柱中，室温13,000 g 离心30 sec，弃滤液。
10. 重复步骤9直至步骤8所有的混合液都通过结合柱。
11. 将RNA吸附柱套入收集管中，加入500 μL Washing Buffer1至结合柱中，13,000 g 离心30 sec，弃滤液。
12. 将RNA吸附柱套回收集管中，加入700 μL Washing Buffer 2至结合柱中，13,000 g 离心30sec，弃滤液。
13. 重复步骤12。
14. 将RNA吸附柱套回收集管中，13,000 g 离心空甩2 min。弃去滤液。
15. 将RNA吸附柱套入新的1.5 mL离心管中，加入30-50 μL Elution Buffer至结合柱中，室温放置1-2 min，然 后13,000 g 离心 1 min 洗脱RNA。
16. RNA放置-80℃保存。

常见问题与解决方案

RNA产量低

1. 样本RNA含量低：不同的土壤样本RNA含量差异较大。对于RNA含量低的样本可适当增加样本量。
2. 样本裂解不充分：研磨不充分，建议采用研磨仪进行研磨，若采用涡旋仪研磨则需将速度调至最大；样本投入量过多，导致裂解不充分，需适当减少样本量或按比例增加裂解液用量。
3. Washing Buffer1和Washing Buffer 2未按要求加入无水乙醇：使用前需确认是否已加入无水乙醇。

RNA降解

1. 样本用量太多：适当减少样本投入量或按比例增加裂解液用量。
2. RNase酶污染：在操作前对工作台面进行RNase酶去除处理，同时采用无RNase酶的实验耗材和器具。

RNA纯度低

1. 腐殖酸污染：降低样本裂解时的环境温度以减少腐殖酸的释放；增加HAR buffer 2A/2B用量；但这两种措施会在一定程度上减少RNA产量。
2. 盐污染：加入Washing Buffer1后静置5 min，然后离心。

注意事项

1. 第一次使用前请先在Washing Buffer1和Washing Buffer 2中分别加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！
2. 使用本产品时应注意做好个人防护，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。
3. 本试剂盒仅供科学研究使用。