货号：400-300

运输储存条件：NuProZol Reagent于 2-8℃运输保存，保质期为一年。

产品简介

NuProZol Reagent适用于从细胞、动物组织样品中快速提取高质量的总RNA 。本试剂含异硫氰酸胍和酚，能迅速裂 解生物样品并失活RNA酶，确保RNA提取的完整性。NuProZol Reagent能快速裂解样本，经氯仿或氯仿替代物抽提后，分为上清层(含RNA) 、中间层和红色的有机层，用异丙醇沉淀、乙醇洗涤得到产量和纯度高的Total RNA 。获得的Total RNA可以直接用于RT-PCR 、qRT-PCR 、Northern Blot 、高通量测序等分子生物学实验。

产品组成

准备事项

    本试剂含酚，最后一步加RNasefreewater 溶解沉淀之前的步骤全程在通风橱操作，并穿戴好防护物品，如防 护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不慎接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗；接触到皮肤， 请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请前往医院治疗。

    自备试剂：氯仿或氯仿替代物（货号：400-301）、异丙醇（新开封或提取RNA 专用） 、75%乙醇(用 DEPC 处 理过的水配制) 、 RNase free water 或者 DEPC 处理过的水。

    提前运行4℃离心机使其温度降低至4℃。

操作步骤

1、匀浆处理

• 动物组织：每 50~ 100 mg 组织加 1 ml 的 NuProZol Reagent 裂解液后匀浆。组织样品容积不能超过 NuProZol Reagent容积 的 10% 。 研磨应尽可能充分快速，并保证低温，以防止 RNA 降解。
• 贴壁细胞：弃去培养液，直接向直径 3.5 cm 的培养板中加入 1 ml NuProZol Reagent裂解液，覆盖并反复吹打裂解细胞。 依据培养板的面积而非细胞的数量来决定所需的 NuProZol Reagent量（每 10 cm2 加 1 ml）。当 NuProZol  Reagent 量不足时会导致 DNA 污染。
• 悬浮生长的细胞：离心沉淀收集细胞，小心弃上清。每 5~ 10×10^6 的动物细胞加 1 ml 的 NuProZol Reagent 。在 NuProZol Reagent 试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。

2、将匀浆样品剧烈振荡混匀1-3 次，室温放置5 分钟，以使核蛋白体完全分解。

3、加入0.2 ml氯仿或氯仿替代物（货号：400-301）。盖紧样品管盖，剧烈振荡 15 秒，室温放置 3 分钟。

4、于4℃离心机 12,000×g 离心 15 分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 存在于 水相中。吸取约 500  μl 水相到新管中（不要触碰中间层）。

5、加入与水相等倍体积的异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置10分钟。12,000× g ，4°C离心10 分钟，通常可看见白 色沉淀，小心弃去上清。

6、加入1ml75%乙醇（用DEPC水或RNase free water配制）。轻弹管底，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

7、于4℃离心机 12,000×g 离心 5 分钟, 小心弃去上清。注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注 意不要吸弃沉淀。

8、在超净台中室温敞口干燥沉淀2 - 5分钟，加入 30 -100μl DEPC 水或 RNase free water 溶解沉淀，室温涡旋或用 移液器反复吹打，使 RNA 沉淀充分溶解。

注意事项

选用质量良好离心管耗材，防止离心管在实验过程破裂或试剂溅出。

为保证提取质量，建议全程使用无RNA酶的试剂耗材，尤其是 RNA 洗脱步骤。

样品用NuProZolReagen 匀浆后，如果不即刻进行实验，加入氯仿之前，置于-70°C 下可放置一个月。保存在

75%乙醇中的RNA 沉淀，2-8°C 可以保存一周，-20°C 条件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比较短，容易降解，建议 提取后尽快进行后续实验，如反转录成 cDNA ，Northern Blot 等。