为什么跑WB上样前，要先煮蛋白？3种情况不用煮

作者： admin

发布于： 2025-11-28 10:38

分类：实验方案

你有没有见过实验室里放着一个工作的电磁炉，上面是铁锅装着沸腾的开水，里面还泡着一些ep管？

做过wb的实验er应该都知道！这不是在做饭，而是在进行蛋白样本的处理。

Western Blot（WB）实验是最常用的蛋白检测技术，可以定性及半定量目的蛋白。在做WB实验的时候，跑胶之前，我们通常会把蛋白样本在95℃-100℃煮5分钟，离心后再进行上样

为什么蛋白上样前要先高温处理？

1. 高温可以使蛋白质变性：在生物化学课程中，我们知道蛋白有复杂的立体结构：一级结构，二级结构，三级结构。这些复杂的立体结构会影响蛋白在凝胶电泳中的迁移速率。在wb实验中，我们需要让蛋白只按分子量大小分离，不能让三级结构对迁移率产生影响。高温处理可以使蛋白质发生变性，失去原有的立体结构，展开成线性的肽链。这样蛋白的空间结构就不会对电泳产生干扰。

2. 促进SDS与蛋白质结合：高温处理可以提高SDS与蛋白的结合率。SDS是变性蛋白电泳里的一个重要的组分，它可以使蛋白质带上负电荷，这样蛋白质原本的电荷将不再干扰迁移，电泳时就能够完全按照分子量大小进行迁移，从而实现分离。

3. 灭活蛋白酶：样本中通常含有一些蛋白酶，高温处理可以使这些蛋白酶灭活，保护目标蛋白不被降解。

注意！3种情况不需要煮蛋白

1. 多次跨膜蛋白样本：

高温煮沸可能会导致膜蛋白聚集，聚集以后的蛋白可能无法正确进入凝胶迁移，堵在孔里，即使进入了凝胶也可能会影响抗体结合等等。所以多次跨膜的蛋白，不建议进行煮样。

2. 核蛋白样本：

核蛋白不建议进行高温煮沸处理，直接离心取上清后上样即可。

3. 热敏感的蛋白：

有的蛋白对高温敏感，煮沸处理会导致它们迅速降解。

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