什么是转染？原理、方法、步骤，这里全部总结好了

转染(Transfection)是指将外源核酸物质(DNA或RNA)导入真核细胞内的过程，是分子生物学和细胞生物学研究中最基础也最重要的实验技术之一。广泛应用于基因功能研究、基因治疗研究等诸多领域。

例如，在研究某个特定基因过表达对细胞生长的影响时，我们可以将含有该基因的 DNA 构建到合适的载体上，然后通过转染技术将这个载体导入目标细胞，观察细胞生长的变化，从而判断该基因过表达的作用。

物理方法

显微注射 ：在显微镜下，利用微量注射器将 DNA 或 RNA 注入单个细胞。其原理是利用物理方式使细胞膜穿孔，让核酸进入细胞内部。

电穿孔 ：利用电脉冲使细胞膜产生瞬时的微孔，从而使外源核酸能够通过这些孔隙进入细胞。

化学方法

比较常用的是脂质体转染和磷酸钙法，借助核酸和化学物质形成复合物，促进外源核酸穿过细胞膜屏障进入细胞内部发挥作用。

生物学方法

病毒载体介导的转染 ：病毒具有天然侵染宿主细胞的能力。在病毒载体介导的转染中，构建包含了需要转染的DNA序列的病毒，然后通过病毒感染的方式将基因导入宿主细胞。

信天翁的ezFect DNA transfection reagent是基于化学方法转染开发的试剂，是新一代水溶性高分子，高电荷阳离子聚合物转染试剂，可与带负电荷的质粒DNA形成稳定的复合物，然后黏附到带有负电荷的细胞表面，透过细胞膜进入细胞内。

适用于把质粒DNA高效瞬时转染到贴壁或悬浮细胞中，可在含血清与抗生素的完全培养基中充分发挥作用。

以下步骤以6孔板，293T细胞为例。

准备6孔板 ：提前准备好 6 孔细胞培养板，确保其清洁、无菌。

细胞状态评估 ：确认 293T 细胞生长状态良好，无细菌、真菌或支原体污染，处于对数生长期，细胞活性高，这样有利于提高转染效率。

 （转染前一天）

1、细胞计数 ：

对 293T 细胞进行计数，确保细胞密度准确

2、接种 ：

将 293T 细胞以每孔 3×10⁵~5×10⁵ 个细胞的密度接种于 6 孔板中，每孔加入适量的完全培养基，使细胞能够在培养板上均匀分布并贴壁生长。

3、培养 ：

将接种后的 6 孔板置于细胞培养箱中培养 18 - 22 小时，使细胞在转染前达到适宜的生长状态和细胞密度，一般细胞汇合度达到 70% - 80% 左右较为合适。

▲接种细胞

▲转染过程

 4、配置 DNA 稀释液 ：

在无菌环境下，每孔准备 2µg 质粒 DNA，将其加入 100µL 无血清培养基中，使用涡旋振荡器轻轻混匀，或者用移液枪吹打 20 次，确保质粒 DNA 充分溶解并分散均匀，避免出现沉淀或团聚现象。

5、制备转染复合物：

向 DNA 稀释液中直接加入3µL 转染试剂，再次使用涡旋振荡器轻柔混匀。

或者用移液枪吹打 20 次，使转染试剂与 DNA 充分接触并形成稳定的转染复合物。然后将混合物置于室温下静置 20 分钟，但不宜超过 30 分钟。

6、加入转染复合物 ：

用移液枪将制备好的转染复合物逐滴、缓慢地加入到相应的细胞培养孔中，注意不要对细胞造成机械损伤。

加完后，轻轻摇晃 6 孔板，使转染复合物在培养基中均匀分布，以确保每个细胞都有机会接触到转染复合物，提高转染效率。

7、转染后培养基更换 ：

转染10小时后，观察细胞状态，若细胞状态良好，除去旧的培养基，注意不要破坏细胞单层，然后向每孔加入 2mL 新鲜的培养基。

8、继续培养 ：

将更换完培养基的细胞继续培养 24 - 48 小时，使目的基因在细胞内充分表达，

可根据不同实验目的（如基因表达分析、功能研究等）以及目的基因的表达特点来确定最佳的后续实验时间。

9、 后续步骤 ：

观察转染效果 ：

在转染后的不同时间点，可以使用荧光显微镜观察细胞（如果质粒带有荧光标记如 GFP），以评估转染效率。

一般观察转染后24 - 48 小时的荧光表达情况比较合适，此时目的基因的表达水平相对较高且稳定。