如何确定细胞实验中的药物给药剂量？教你摸浓度

在细胞实验的起步阶段，许多同学都会接到导师这样的任务：“这周把这个药物的浓度摸一下。”

面对这个看似简单实则关键的问题，新手往往感到无从下手。那么如何才能科学地确定一个药物的给药剂量呢？本文将为您系统梳理从文献调研到最终确定的完整流程。

一

别瞎猜，先查文献！

动手之前，先开电脑。查文献不是为了抄袭答案，而是为了找到你的“起点”。

怎么查

打开PubMed。

输入关键词：你的药物名 + 你的细胞名 + "cell viability"（或cytotoxicity）。

看什么

重点看别人用了哪些浓度？处理了多久？

查到之后怎么办

如果查到好多篇：你会看到一个大概的范围（比如10-100 μM）。记住，别直接用它！ 你要以这个范围为中心，上下多设几个浓度去做实验。

如果一篇都没查到：没关系！去找“同类药物”或“同类细胞”的文献，或者直接设一个超大的范围（从1 nM到100 μM）去探探路。

二

实战！开始做第一个毒性实验

现在可以进细胞房了。

推荐方法：CCK-8 (Cell Counting Kit-8) 法。其原理是通过水溶性四唑盐WST-8在活细胞线粒体脱氢酶作用下生成橙黄色甲臜染料，颜色深度与活细胞数量成正比。

该方法灵敏度高、重现性好、对细胞无毒害。（可使用信天翁超敏CCK8试剂盒，货号100-120）

备选方法：MTT法、MTT法生成的水不溶性甲臜结晶需溶解，步骤稍繁琐。

怎么设计实验

根据文献，设5-8个浓度。比如文献说40μM有效，你就设 10, 20, 40, 80, 160 μM。

接种细胞至96孔板，待细胞完全贴壁后（通常24小时）给药。

按照预设的浓度梯度和时间点（如24h, 48h）处理细胞。

在终点加入CCK-8试剂，孵育适当时间（1-4小时）。

使用酶标仪测定450 nm波长处的吸光度（OD值）。

数据处理

计算各浓度组的细胞存活率：

细胞存活率 (%) = [(OD药物组 - OD空白组) / (OD溶剂对照组 - OD空白组)] × 100%

教程可以看这篇

第一次结果不理想？太正常了！

如果细胞全死了：说明浓度太高，下次全部降低。

如果细胞完全没影响：说明浓度太低，下次全部提高。

直到你做出一个像样的“S”型曲线，恭喜你，快成功了！

三

算出关键数字：IC50 和 NOEC

拿到“S”型曲线的数据后，我们用软件来算出两个最重要的值。

IC50（半抑制浓度）：让一半细胞“下岗”所需的药物浓度。这个值越高，说明药物越没效果。

NOEC（无毒浓度）：对细胞生长完全没有影响的最高浓度。

怎么算？ 把浓度和细胞存活率输入GraphPad Prism等软件，它会自动帮你拟合曲线并计算出这些值。记得实验要重复至少3次，取平均值！

四

选浓度！为你的实验目的服务

这是最关键的一步！选什么浓度，完全取决于你想干什么。

情景一：你想看药物怎么“杀死”细胞（比如抗癌实验）

选哪个浓度？：重点关注 IC50。

怎么设梯度？：

设三个浓度：低剂量（0.5 x IC50）、中剂量（IC50）、高剂量（2 x IC50）。这样很容易看出“剂量越高，死得越多”的效果。

情景二：你想看药物怎么“保护”细胞（比如抗衰老、抗炎）

选哪个浓度？：选 NOEC 或比它更低的浓度！

为什么？你首先要证明药物本身没毒，之后看到的“保护作用”才可信。

怎么设梯度？：设两个浓度：低剂量（0.5 x NOEC） 和 高剂量（NOEC）。

现在，你心里有谱了吗？从查文献开始，一步步来，这个任务肯定能搞定！加油！