包病毒滴度低或不出毒咋回事?这个慢病毒感染增强液救大命了

作者: admin
发布于: 2025-11-28 09:54
分类: 实验方案

有多少人感觉病毒包装就是一个玄学,为啥别人次次成功,而自己做经常滴度低,感染效率不理想?

首先让我们看看影响病毒包装的因素



病毒载体的选择

慢病毒

优点:它能把自己带的基因敲入细胞的基因组里,变成细胞基因组DNA的一部分。只要这个细胞活着并且分裂,外源的DNA就能一直表达下去。所以适合需要长期、稳定做研究的实验。

包装周期相对短点。

缺点:① 感染细胞的效率没那么高;② 它自己不能“繁殖”,所以病毒产量低、浓度(滴度)也低,通常需要先体外实验,不太够直接做动物注射。

腺病毒

优点:感染效率高!而且纯化后能直接注射到动物体内。它还能体外“扩增”,一次能拿到很高浓度的病毒。

缺点:它不进基因组,只在细胞质里暂存,过一阵子就被细胞清除了。所以是短期(瞬时) 表达。

包装周期更长。



简单总结:

想做稳定细胞株,长期观察基因功能?选慢病毒。

想快速在体外或动物体内看到短期、强烈的效果?选腺病毒。





病毒包装的步骤

包装病毒是个精细活,成功与否取决于一串“流水线”上的每个环节:

细胞状态:用来包装病毒的“工厂”细胞必须健康。

载体和质粒:用的“图纸”(载体系统)要靠谱(建议用成熟的商业系统),而且你构建好的“施工图”(重组质粒)不能有错。

操作与监控:转染这个“开工”步骤要精准,之后24、48小时要盯着细胞工厂的状态和有没有荧光(报告基因)来看初步成败。

基因本身:你研究的基因如果太大,或者它表达的蛋白对细胞有毒性,也会严重影响病毒产量。



感染效率:三方协力

感染效率不高别只怪病毒,这三方面都可能是原因:

病毒本身:浓度(滴度)够不够高?

目标细胞:不同的细胞天生对病毒的“易感性”差别很大。

你的操作:比如加入病毒时的细胞密度、病毒用量、培养时间等,都需要自己优化。



师兄师姐的宝贵经验:
使用增强液

做难转细胞的病毒感染实验的人都懂吧… 慢病毒滴度不可控,难提高,导致感染效率总是不理想!

总想着重复包装来提高滴度,还是做不好,包病毒包到怀疑人生。直到挖到这款带病毒感染增强液的试剂盒!

加了自带的增强液,包病毒的步骤都没变,滴度也没增加,但是效率直接飙升!

省了多少重复实验的功夫谁懂啊!

试剂盒里试剂配得整整齐齐,新手跟着说明书走也不翻车,关键是增强液不用额外花钱买,性价比直接拉满~

用一样的低滴度的GFP慢病毒感染细胞,感染结束后48小时拍照。

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本篇文章来源于微信公众号:信天翁GOONIE
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